DNA提取純化流程
你知道DNA提取純化流程有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！
一、樣本采集與保存
1.新鮮：新鮮樣本中受到內(nèi)源性核酸酶影響相對最小，得到DNA質(zhì)量相對更好。
2.適量：投入過多樣本，后續(xù)樣本裂解不充分從而影響DNA提取情況，還會引入過多雜質(zhì)及內(nèi)源性核酸酶。
3.不同類型的樣本在采集與保存時也會存在差異
4.植物組織保存時間：對于含有多糖多酚等次生代謝產(chǎn)物的衰老葉片可在4℃黑暗環(huán)境下饑餓1-2天；進行低溫或冷凍保存可以避免內(nèi)源性DNA酶對樣本中的DNA進行一個降解。
5.動物組織保存時間：-20℃短期保存（1-3個月），-70℃長期保存；福爾馬林固定時間8-24h內(nèi)為宜，樣本存放時間不宜超過1年；FFPE樣本保存溫度4℃，建議不超過3年。
二、樣本處理方式
1.動物組織：液氮研磨或勻漿。
2.植物組織：液氮研磨（最推薦），研磨充分又保證樣本處于低溫條件下避免DNA降解。
3.哺乳動物血液樣本：DNA存在于含有細胞核的白細胞中，而大量存在的紅細胞會引入更多雜質(zhì)和核酸酶，所以需要提前使用紅細胞裂解液對紅細胞進行去除。
4.細胞樣本：貼壁細胞胰酶消化處理再做收集，懸浮細胞只要離心棄上清。
5.細菌樣本：溶菌酶破壁處理，如金黃色葡萄球菌加入一定量的溶菌酶在37℃條件下孵育30min就可完成破壁的處理。
6.真菌樣本：酶解破壁或液氮凍融或超聲裂解法。
7.FFPE樣本：脫蠟處理（二甲苯或礦物油類的物質(zhì)進行脫蠟處理）。
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更新時間：2023-11-21
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